产  品  信  息

产品名称 ：  大肠菌群平板计数成套试剂

货   号： SP002

单   位： 套；1套产品检测1个批次的5个样品。

包   装： 10套/箱

每套产品组成：

●大肠菌群平板计数集成平板组1组   ● VRBA培养基（300mL/瓶）1瓶   ●10管组BGLB肉汤管1只

1、大肠菌群平板计数集成平板组：每一组由5块集成平板组成，每块集成平板含4个方形平皿；1块平板检测一个样品，5块平板共检测一个批次的5个样品。自上而下依次编号为1、2、3、4、5，代表该批次5个样品的编号，每一个样品使用一块集成平板，做两个连续稀释度，每个稀释度两个平皿；使用前，将该样品的批次编号标注在集成平板组的标签区域内，使用时依次自上而下取用集成平板，左手揭开集成平板盖，右手持无菌吸管将样品稀释液加入平皿内，每加完一个样品后盖上集成平板盖，依次自下而上叠加；当加完一个批次的5个样品后，倾注平板计数培养基；倾注时依次从上而下拿取已经加好样品的集成平板，每倾注好一块集成平板，立即在实验台上前后左右平移混匀，然后自下而上叠加，待琼脂凝固后以一组为单位翻转过来。

2、VRBA培养基（300mL/瓶）：使用前经水浴加热液化并恒温至48℃备用；每瓶总量为300mL，为1组共5块集成平板的使用量，每个平皿约15mL。

3、10管组BGLB肉汤管：用于证实试验。使用时，左手揭开管盖，右手持专用开孔器，经火焰消毒并冷却（或用酒精消毒），在组合管的封膜上连续开孔；用接种环选取1组5个平板上的10个将典型和可疑菌落接种到管内，1管接种1个菌落；经培养后，产气窗内观察产气情况；产气窗内有气泡产生者证实为大肠菌群阳性。

                                                                使 用 方 法

  1   1.液化培养基：取1瓶VRBA培养基水浴液加热化后恒温至48℃备用

  2   2.样品处理：

2.1.固体样品和半固体样品取25g于盛有225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内经均质处理制成1:10的样品匀液，再用样品稀释管做成1：100和1:1000的或更高稀释度的连续稀释度的样品匀液。

2.2.液体样品吸取25mL样品置于有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶或其他无菌容器中充分振摇,制成1∶10的样品匀液；再用样品稀释管做成1：100和1:1000的或更高稀释度的连续稀释度的样品匀液。

3.加样：用移液器吸取两个连续稀释度的样品稀释液加入集成平板内，一个稀释度两个平板，每个平板1mL。注：包装饮用水采用原液和1:10两个稀释度检验。

     4. 倾注平板并培养：将液化并恒温至48℃的VRBA培养基倾注集成平板;每个平板约15ml，然后在操作台上将平板前后或左右移动，使培养基和样品充分混匀，待培养基凝固后翻转集成平板板置于 36℃±1℃ 培养 18h～24h。

    5. 菌落数选择：选取菌落数在 15CFU～150CFU 之间的平皿,计数平皿上出现的典型和可疑大肠菌群菌落，最低稀释度平板低于15CFU 的记录具体菌落数。

       6. 证实试验：从1组5个集成平板中选取10个不同类型的典型和可疑菌落（不足10个菌落，全部选取）依次接种于10管组BGLB肉汤管中，每管接种1个菌落。置于培养箱内 36℃±1℃ 培养 24h～48h后观察产气情况。凡产气窗内有气泡者为阳性管。

      7. 结果报告：经最后证实为大肠菌群阳性的管数比例（该比例数适用于该批次5个样品的平板上的菌落数计算）乘以上述“5.菌落数选择”中计数的平板菌落数,再乘以稀释倍数,即为每 g(mL)样品中大肠菌群数。例:10^-3样品稀释液1mL,在 VRBA 平板上有100个典型和可疑菌落,挑取其中10个接种BGLB肉汤管,证实有6个阳性管,则该样品的大肠菌群数为:100×6/10×10³/g(mL)= 6.0×10⁴CFU/g(mL)。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀 释倍数计算。